大鼠脑缺血再灌注模型
造模方法
大鼠麻zui仰卧固定于恒温手术台上。暴露颈总动脉颈(CCA),分离颈内动脉(ICA)和颈外动脉(ECA)。CCA近心端结扎并另备线,ICA远端放置微型动脉夹,在CCA靠近分叉处插入鱼线,即线栓由颈内动脉分叉处计长度为1.85±0.05cm,说明丝线头端己到达ICA分支MCA以和大脑前动脉(ACA)的分叉处,阻断了同侧ICA和经ACA来自对侧ICA的血供,缺血1h。(2)模型特点大鼠在造模4d后开始出现一系列的渐进理变化,肺功能检查模型大鼠第4日时的胸腔气体容积(TGV)值增加65%,而到第8日就不再变化,而造模前后大鼠气道阻力(Raw)值则变化无显著性差异。
手术造模图片
病理判定图片
睡眠剥夺模型
实验用金属箱直径35 cm, 每箱装1只大鼠。REMSD 各组分别置于直径为6.5 cm的小站台上,对照组大鼠置于直径15 cm的大站台上,周围是水环境,水深3 cm,平台在水面以上1 cm,于平台以上14 cm 处放笼罩,上面放水和食物。水温和室温保持在25 C,每日换水并打扫实验箱。REMSD 组大鼠在小台上屈曲而立,在快动眼睡眠(rapid eye movement sleep, REMS) 时,由于伴随全身肌肉松弛和节律性垂头,大鼠落入水中而惊醒,再爬上站台。又如用狗做xin肌梗死模型照理很合适,因为它的冠状动脉循环与人相似,而且在实验动物中它适宜做暴露心脏的剖胸手术,但狗结扎冠状动脉的后果差异太大,不同狗同一动脉同一部位的结扎,其后果很不一致,无法预测,无法标准化。用此方法自18:00开始连续剥夺大鼠的REMS至相应实验时间点。
旷场实验( open field test, OFT )
实验装置为高60 cm、 底面边长100 cm、内壁涂黑的无盖方箱,底面平均分为25个小方格,正上方2 m处架一摄像机,镜头对准箱底,实验在安静环境下进行,大鼠置于方箱底面中心,同时进行摄像和计时,3 min 后停止摄像,更换动物后,继续进行实验。2次实验之间清洗箱壁及底面,以免上次动物余留的信息影响下次实验结果。计分方法:通过放像设备,观察大鼠3 min内越过的格子数为水平得分,后肢站立次数为垂直得分,两者之和为OFT总得分。动物模型设计注意事项注意所选用动物的实用价值模型应适用于多数研究者使用,容易,实验中便于操作和采集各种标本。REMSD实验前后均进行旷场实验。
前lie腺素E2对大鼠巨噬细胞株NR8383 合成血管内皮生长因子促进人脐静脉血管内皮细胞成管、迁移的影响
方法:分别采用0.1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2+10 nmol/L EP2受体抑zhi剂AH6809+10 nmol/L EP4受体抑zhi剂AH23848 处理的NR8383 细胞作为各实验组,选择未经PGE2以及其特异性受体抑zhi剂处理的NR8383 细胞作为对照组,采用Western blot 和qPCR方法检测各组NR8383细胞内VEGF蛋白以及mRNA的表达水平;(三)胰液和胆汁在动物实验中,主要是通过对胰总管和胆总管的插管而获得胰液或胆汁。收集以上各处理组的细胞培养上清液分别刺激1HUVECs,运用TRANSWELL 小室、Matrigel 胶细胞成管实验等实验方法,观察PGE2调控巨噬细胞对HUVEC 迁移效应和成管能力的影响。
结果:随着NR8383 细胞培养液中加入PGE2浓度增gao,其 VEGF蛋白表达和VEGF mRNA的表达水平显著升高(P<0.05);0.1 nmol/L、1 nmol/L PGE2处理过的NR8383细胞培养上清液可以显著增加HUVEC细胞形成的小管面积,形成小管面积随着PGE2处理浓度的增加而增加(P<0.05);也可用锋利刀片割破尾动脉或尾静脉,让血液自行流出,采血后,消毒,止血。HUVECs的迁移运动也随着PGE2处理浓度的升高不同程度的增强,HUVECs趋化的数量显著升高(P<0.05);研究发现PGE2特异性的EP2/EP4 受体拮抗剂AH6809/AH23848,可以显著抑制PGE2 增强NR8383 细胞内VEGF mRNAs 表达的作用并且也显著抑制PGE2 增强 NR8383细胞促进HUVECs成管和趋化能力的效应(P<0.05)。
以上信息由专业从事小鼠动物实验外包的英瀚斯于2023/3/23 4:02:08发布
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